Protocoles d'analyses du sperme et des interactions spermatozoïdes - glaire cervicale

Méthode de préparation des lames de morphologie

Matériel

• Microscope (gross. 1000x)
• Lames à bandes dépolies 76x26mm
• Lamelles 24x50mm
• Baume d’inclusion Eukitt (Merck)
• Bâtonnet en verre
• Alcool-Ether (1 :1)

Préparation des lames

L’étalement sur lame se fait avec le sperme natif liquéfié sur 3 lames :

• Une goutte de 8 µl est déposée sur chaque lame et étalée à l’aide d’une autre lame et de façon uniforme.Laisser sécher.
• Fixer les lames 10 minutes dans l’alcool-ether.
• Les lames sont prêtes pour être colorées.

Si la concentration est supérieur à 10 mio/ml, le sperme est utilisé tel quel.

Pour les concentrations inférieures à 10 mio/ml, il est préférable d’effectuer une centrifugation et de faire des lames à l’état natif et sur le culot.

• 1 lame fixée et colorée au Papanicolaou
• 1 lame fixée non colorée
• 1 lame non fixée et non colorée.

Procédure

La lame fixée et colorée est utilisée pour l'interprétation de la morphologie.

La lecture de la morphologie est effectuée sur 100 ou 200 spermatozoïdes de préférence au grossissement 1000x (pour les cas ou, malgré l’utilisation du culot, l’évaluation sur 100 spermatozoïdes s’avère difficile, il est possible de faire une lecture sur seulement 50 spermatozoïdes (doubler les valeurs) et classés dans leur catégories respectives :

• % de formes normales.
• % de têtes anormales avec classification détaillée.
• % d’anomalies de la pièce intermédiaire.
• % d’anomalies du flagelle.

Les cellules de la spermatogenèse et autres cellules rondes sont comptées sur 100 ou 200 spermatozoïdes. Les spermatozoïdes immatures sont également comptés, mais pas englobés dans le nombre de cellules rondes.

Calcul pour obtenir le nombre de mio/ml de cellules rondes :

Mio/ml de spermatozoïdes x nombre cellules rondes

100