Protocoles d'analyses du sperme et des interactions spermatozoïdes - glaire cervicale

SpermMAR Test IgA

Test qualitatif de détection d'anticorps anti-spermatozoïdes

Les anticorps anti-spermatozoïdes sont des classes IgA et IgG.

Les IgA semblent être responsables de l'infertilité immunologique (environ 8% des cas d'infertilité masculine).

La présence d'IgA en absence d'IgG est très rare.

Principe

Des billes de latex ont été enrobées d' anti- IgA humaines. On mélange les billes avec l'échantillon à tester (sperme). Les spermatozoïdes qui portent des IgA vont donc être agglutinés aux billes de latex.

Test direct (Test utilisé par le laboratoire)

On teste la présence d'anticorps sur les spermatozoïdes en incubant du sperme frais non traité.

Procédure

Matériel

Kit ORTHO SpermMar IgA Test (Fertility Technologies, Inc).

ORTHO SpermMar Particules Latex.

Matériel de laboratoire

• Lames en verre 76X26 mm.
• Lamelles couvres objets 24X40 mm.
• Pipette de 10µl.
• Microscope.
• Oculaire 10x.
• Objectif 40x.
• Chambre humide.

Manipulations

1. Utiliser les réactifs et le sperme uniquement à température ambiante.
2. Bien mélanger l'échantillon ainsi que le flacon de réactif.
3. Déposer 10µl de sperme sur une lame en verre, puis 10µl de particules de latex. Mélanger avec le bord d’un couvre objet.
4. Recouvrir le tout d'une lamelle couvre objets (garder la lame dans un pétri humide à température ambiante).
5. Commencer la première lecture (Objectif 40X) après 2-3min. (*) et la seconde lecture à 10min.

Le résultat de la première lecture sera retenu, sauf si un résultat négatif à 2-3min devient positif après 10min. Dans ce cas c'est ce résultat que l'on retiendra.

Par contre si un résultat devient douteux après 10min avec seulement 10-15% de spermatozoïdes agglutinés aux billes de latex, le test sera à la limite de la détection et devra être refait lors du prochain spermogramme.(A signaler sur la feuille de résultats.)

(*) Faire une mobilité sur 100 spermatozoïdes, (cf.technique) en parallèle à partir du sperme natif. La mobilité des catégories 2 et 3 (spermatozoïdes mobiles et progressifs) de celui-ci sera comparée à la mobilité du MarTest. Les résultats comparatifs des mobilités seront exprimés sous cette forme:

mobilité spermatozoïdes natif / mobilité spermatozoïdes MarTest

Exemple: 35% de spermatozoïdes mobiles / 32% de spermatozoïdes mobiles = (35/32)

NB: Si la mobilité diminue (< 10% spermatozoïdes mobiles) dans le sperme natif, les résultats deviennent ininterprétables.

Résultats

L'absence d'anticorps sur les spermatozoïdes est montrée par le mouvement libre de ceux-ci (Ils ne sont pas recouverts de billes de latex).

Lorsqu'il y a présence d'anticorps, les billes de latex peuvent recouvrirent partiellement les spermatozoïdes. Dans quelque cas ils peuvent même être immobilisés par un trop gros agrégat de billes.

On calcule le % de spermatozoïdes mobiles (Catégories 3,2,1) agglutinés aux billes de latex:

• Les valeurs de 0 à 9% sont considérées comme négatives.
• Les valeurs de 10% à 39% sont considérées comme douteuses.
• Les valeurs de 40% à >40% sont considérées comme positives.

Limite du test

Le test direct ne peut se faire que si une quantité suffisante de spermatozoïdes mobiles sont présents dans l'éjaculat.

Le résultat peut être imprécis si la concentration des spz mobiles est trop faible (<20% de mobiles, 5-9 mio/ml), mais nous conseillons quand même de faire le test (jusqu’à 10% de mobiles), car l’imprécision devient importante pour des tests qui sont négatif / douteux (à signaler sur la feuille d’examen). Si les anticorps sont présent en grande quantité (≥40% de spermatozoïdes agglutinés aux billes de latex) le résultat sera nettement positif.

Lorsque la concentration est inférieur à 10 mio/ml et cela jusqu’à 5 mio/ml, il serait souhaitable de faire uniquement une mobilité à 3minutes. Effectivement suite à la dilution avec les solutions du MarTest (moins de spermatozoïdes par champs), le temps de lecture s’est vu rallonger et la deuxième mobilité à 10minutes est souvent impossible à réaliser dans de bonnes conditions.

En dessous de 5 mio/ml, il faudrait une mobilité de ≥50% pour pouvoir faire le test.